流式细胞术是一种利用流式细胞仪对处于快速直线流动状态中的单列细胞或生物颗粒进行多参数、高速定性和定量分析或分选的技术。其优势包括检测速度快、测量指标丰富、采集数据量大及分选纯度高等特点。针对流式实验中常见的三大问题，Elabscience的专家为您总结了有效的解决方案，帮助您在实验中避免陷阱！

检测结果无信号或信号弱

可能原因与解决方案：

• 抗体贮存不当：抗体应保存在2-8℃中，避免光照和反复冻融。
• 抗体过期使用：选择处于保质期内的抗体。
• 过度固定：尽量选择新鲜样本以减少固定影响，预实验可帮助确定适合的固定剂和条件。
• 荧光染料淬灭：染色后的样本应避光保存，尽快进行测定。
• 自发荧光过高：使用空白对照确定自发荧光水平，根据“荧光素强度”“相互干扰”等原则调整染色时间和条件。
• 抗体浓度过低：进行抗体滴定以确定最佳浓度。
• 细胞数量过多：调整细胞密度，建议低于1×10⁷个/ml。

荧光强度过高

可能原因与解决方案：

• 染色时间太长：根据实验情况调整抗体染色时间。
• 抗体浓度过高：滴定抗体以找出最佳浓度。
• 补偿不当：选择发射光谱不重叠的荧光染料，确保每种染料的信号得到正确补偿。
• 洗涤不充分：优化洗涤步骤，适当增加洗涤次数。

背景高

可能原因与解决方案：

• 死细胞、粘连体非特异性结合：使用新鲜样本并排除死细胞，确保样本制备为单细胞悬液。
• 染色时间过长：根据实验情况调整染色时间。
• 洗涤不充分：适当增加洗涤次数以降低背景噪声。
• 补偿不当：使用发射光谱不重叠的染料，确保信号得到正确补偿。

在实际操作中，实验结果可能受到多种因素的影响，包括抗体选择、样本制备、实验操作及仪器设置等。我们列举了常见的异常情况及相应的解决方案，希望能帮助您实现满意的实验结果。更多流式细胞术相关的干货知识，敬请持续关注金年会金字招牌诚信至上，为您的研究提供支持与帮助！