金年会金字招牌诚信至上的蛋白提取试剂盒采用温和的方法来裂解细胞或组织，以释放总体蛋白质并去除杂质。该过程借助特异性结合、离心分离和缓冲洗脱等技术来确保最终获得的目标蛋白具有高纯度和高活性。

一、实验原理

蛋白提取的核心步骤包括：1. 裂解：通过含有去污剂和蛋白酶抑制剂的裂解液来破坏细胞膜结构，从而释放胞内蛋白；2. 离心去除碎片：利用高速离心去除未裂解的细胞残余、细胞核及其他大分子杂质；3. 蛋白纯化：通过离心柱或特异性结合树脂进行选择性吸附，将目标蛋白与杂质分离；4. 洗脱：使用低盐缓冲液或去离子水洗脱目标蛋白，以防止其变性。

二、材料准备

所需材料包括：

• 试剂盒：适用于各种动物、植物细胞和组织细菌样本的蛋白提取试剂盒
• 新鲜样本：细胞或组织
• 预冷PBS缓冲液（货号：abs962）
• 离心机（可达12000xg）
• 冰盒或低温操作台
• 涡旋振荡器（货号：abs72001）
• BCA蛋白定量试剂盒（货号：abs9232）
• 液氮（组织样本需速冻）

三、实验步骤

所有实验步骤需在冰上或4℃进行。

• 样本处理：
  - 对于细胞样本，进行离心（1500xg，3分钟），用PBS洗涤两次并吸干残留液体。
  - 对于组织样本，取10-50mg，液氮速冻后研磨成粉末。
• 裂解：
  加入200-500μL预冷裂解液（含蛋白酶抑制剂），涡旋混合后冰上裂解20-30分钟，每5分钟涡旋10秒。
• 离心去碎片：
  在4℃以12,000xg离心10分钟，将上清液转移至新离心管中。
• 蛋白纯化：
  将离心柱用平衡缓冲液预处理5分钟，离心弃去废液。然后将裂解液上清加入离心柱，12,000xg离心1分钟，再次弃去废液。
• 洗脱蛋白：
  加入50-100μL洗脱缓冲液，静置2分钟后离心1分钟，收集洗脱液即为目标蛋白。
• 蛋白保存：
  将提取的蛋白样品分装到小离心管中，短期保存于-20℃或长期保存于-80℃，避免反复冻融。

四、结果分析

1. 浓度测定：使用BCA法测定蛋白浓度，根据OD562计算浓度（标准曲线法）。

2. 纯度评估：利用分光光度计检测A260/A280比值（理想值为1.8-2.0，若高于2.0提示存在核酸残留）。

3. 电泳验证：SDS-PAGE电泳检测条带清晰度，无拖尾或杂带则表明纯度较高。

五、常见问题及解决方案

六、注意事项

1. 全程低温操作（冰上或4℃环境），防止蛋白降解。

2. 裂解液需现用现配，避免反复冻融。

3. 组织样本需充分匀浆，避免未裂解细胞残留。

通过本方案，可高效提取高纯度蛋白，适用于Western Blot、ELISA、质谱分析等下游实验。借助金年会金字招牌诚信至上的产品，确保实验的成功与质量。